Tyrimo laikas žymiai sutrumpėja nuo maždaug valandos iki kelių minučių naudojant naujai aprašytą RTF-EXPAR metodą, kuris naudoja atvirkštinės transkriptazės neturintį (RTF) metodą konvertuojant RNR į DNR po to EXPAR (eksponentinė amplifikacijos reakcija), skirta amplifikacijai vienoje temperatūroje.
Kurso kontrolė Covid-19 plitimui reikalinga tiksli ir greitesnė virusų tyrimo strategija. RT-PCR (atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininė reakcija), tiksliausias šiuo metu naudojamas tyrimo metodas yra dviejų pakopų testas, kurio vienam mėginiui reikia apie 60 minučių.
Birmingamo universiteto mokslininkai pranešė apie naują SARS-CoV-2 aptikimo metodą. Tai leistų atlikti daug greitesnį testavimą ir yra pakankamai jautrus.
Viruso RNR aptikimas pagal RT-PCR (atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininė reakcija) apima virusinės RNR pavertimą komplementaria DNR (cDNR), o po to cDNR amplifikacija atliekama kiekybine PGR (qPCR). Tada cDNR aptinkama naudojant fluorescencinius dažus. Tai trunka iki valandos.
Tyrimo laikas žymiai sutrumpėja nuo maždaug valandos iki kelių minučių naudojant naujai aprašytą RTF-EXPAR metodą, kuris naudoja atvirkštinės transkriptazės neturintį (RTF) metodą RNR pavertimui į DNR po to EXPAR (eksponentinė amplifikacijos reakcija), skirta amplifikacijai vienoje temperatūroje. Stiprinimas, vykstantis vienoje temperatūroje, yra raktas į greitį, nes taip išvengiama ilgų RT-PGR šildymo ir aušinimo etapų. Be to, amplifikuojama DNR dalis yra mažesnė, palyginti su RT-PGR. Taigi EXPAR per kelias minutes sukuria iki 108 DNR produkto grandinių. Duplekso susidarymas stebimas, kaip taikant RT-PGR metodą, naudojant fluorescencinį dažą SYBR Green.
Įdomu tai, kad naujasis metodas gali būti modifikuotas, kad būtų galima aptikti keletą kitų infekcinių ligų, kurias sukelia RNR virusai, pavyzdžiui, Ebola, RSV ir kt.
Šaltiniai):
Carteris ir kt. (2020). Po 5 minučių SARS-CoV-2 RNR aptikimas naudojant atvirkštinės transkriptazės eksponentinės amplifikacijos reakciją, RTF-EXPAR. Išankstinis spausdinimas. Paskelbta medRxiv Paskelbta 04 m. sausio 2021 d. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
