Šiuo metu praktikoje atliekami laboratoriniai COVID-19 diagnozavimo tyrimai pagal tarptautinių ekspertų organizacijų rekomendacijas yra peržiūrimi ir vertinami.
COVID-19 liga, kilęs iš Uhano Kinijos, iki šiol paveikė daugiau nei 208 šalis. Viso pasaulio mokslo bendruomenei per pastaruosius kelis mėnesius buvo iškeltas didelis iššūkis tobulėti diagnostiniai tyrimai forumas Covid-19 ligų aptikimas, siekiant ištirti pacientus ir įtariamus asmenis, siekiant veiksmingai valdyti ir kontroliuoti pandemiją.
Prieš vertindami dabartinius COVID-19 nustatymo metodus ir praktiką, pirmiausia išsiaiškinkime, kas sukelia COVID-19 ir kaip kuriami diagnostiniai testai, skirti pacientams patikrinti, ar nėra šios ligos. COVID-19 ligą sukelia teigiamos grandinės RNR virusas kurie yra zoonoziniai, o tai reiškia, kad jie gali kirsti rūšių barjerus nuo gyvūnų iki žmonių ir gali sukelti žmonių ligas nuo peršalimo iki sunkesnių ligų, tokių kaip MERS ir SARS. COVID-19 sukeliantį virusą Tarptautinis virusų taksonomijos komitetas (ICTV) dabar pavadino SARS-CoV-2, nes jis labai panašus į SARS protrūkį (SARS-CoV) sukėlusį virusą. Diagnostinį COVID-19 ligos testą galima sukurti įvairiais būdais.
Populiariausias ir šiuo metu taikomas metodas visame pasaulyje – sukurti diagnostinį testą, galintį aptikti patį SARS-CoV-2 virusą. Tai testas yra pagrįstas viruso genomo aptikimu paciento mėginyje RT realaus laiko PGR (atvirkštinės transkriptazės realaus laiko polimerazės grandinės reakcija). Tai reiškia, kad viruso RNR paverčiama DNR naudojant fermentą, vadinamą atvirkštine transkriptaze, o vėliau DNR amplifikuojama naudojant specifinį pradmenų rinkinį ir fluorescencinį zondą, kuris jungiasi prie tam tikros viruso DNR srities, naudojant Taq polimerazę ir aptinkant fluorescencinį signalą. Šie testai vadinami NAAT (nukleino rūgščių amplifikacijos testais). Šis metodas gali būti labai naudingas labai anksti nustatant nukleino rūgšties buvimą paciento mėginyje, net ir besimptomiams pacientams, kuriems nepasireiškia COVID-19 ligos simptomai (ypač 14-28 dienų inkubaciniu periodu) ir vėlesnėje dalyje. taip pat kai liga yra pilna.
Įvairios įmonės visame pasaulyje per pastaruosius kelis mėnesius dirbo lenktynėse su laiku, kad sukurtų NAAT pagrįstą diagnostinį testą SARS-CoV-2 aptikti, remiantis CDC (ligų kontrolės centru), Atlanta, JAV ir PSO gairėmis. 1, 2). Sveikatos priežiūros institucijos visame pasaulyje patvirtino šiuos testus, skirtus skubiam naudojimui SARS-CoV-2 aptikimui. Iki šiol taikomi viruso genai apima N, E, S ir RdRP genus kartu su atitinkama teigiama ir neigiama kontrole. Tokiam tyrimui reikia paimti pacientų mėginius iš viršutinių kvėpavimo takų (nosiaryklės ir burnos ir ryklės tepinėlis) ir (arba) apatinių kvėpavimo takų (skreplių ir (arba) endotrachėjos aspirato arba bronchoalveolių plovimo). Tačiau virusą galima aptikti ir kituose mėginiuose, įskaitant išmatas ir kraują. Mėginius reikia greitai ir tinkamu būdu paimti, laikantis visų būtinų atsargumo priemonių ir laikantis biologinės saugos praktikos (pagal PSO nustatytas gaires[1]), iš pacientų, atitinkančių įtariamo COVID-19 atvejo apibrėžimą, juos konservuojant ir supakuojant. gerai, jei jį reikia greitai nugabenti į diagnostikos centrą ir apdoroti (RNR ekstrahavimas biologinės saugos spintelėje BSL-2 arba lygiavertėje įstaigoje) taip, kad būtų užtikrintas mėginio vientisumas. Visa tai turi būti atliekama pirmenybės principu, siekiant geresnio klinikinio valdymo ir protrūkio kontrolės.
Įvairių turimų NAAT pagrįstų testų, sukurtų pagrindinių diagnostikos kompanijų visame pasaulyje, aptikimo laikas svyruoja nuo 45 minučių iki 3.5 valandos. Šiuose tyrimuose atliekami įvairūs patobulinimai, siekiant juos paversti taškiniais tyrimais ir norimus rezultatus pasiekti per kuo trumpesnį laiką, nepakenkiant rezultato tikslumui, kad padidėtų per dieną atliekamų tyrimų skaičius.
Kitos diagnostinio tyrimo parinktys yra greitieji diagnostikos testai (RDT) kurie aptiktų viruso antigenus/baltymus, kurie yra išreikšti SARS-CoV-2 viruso dalelių paviršiuje, kai jie dauginasi ląstelėse-šeimininkėse ir sukelia ligą arba šeimininko antikūnus, reaguodami į infekciją; Šis tyrimas nustato antikūnų buvimą žmonių, kurie, kaip manoma, buvo užsikrėtę COVID-19, kraujyje (3).
RDT tikslumas ir atkuriamumas viruso antigenams aptikti priklauso nuo kelių veiksnių, įskaitant laiką nuo ligos pradžios, viruso koncentraciją mėginyje, mėginio kokybę ir apdorojimą bei testo rinkiniuose esančių reagentų sudėtį. Dėl šių kintamųjų šių testų jautrumas gali svyruoti nuo 34% iki 80%. Pagrindinis šios parinkties trūkumas yra tas, kad virusas turi būti dauginimosi ir infekcinės stadijos, kad būtų galima aptikti viruso baltymus.
Panašiai, testai, nustatantys šeimininko antikūnus, yra pagrįsti antikūnų atsako stiprumu, kuris priklauso nuo tokių veiksnių kaip amžius, mitybos būklė, ligos sunkumas ir tam tikri vaistai ar infekcijos, slopinančios imuninę sistemą. Pagrindinis šios parinkties trūkumas yra tas, kad antikūnai gaminami praėjus kelioms dienoms ar savaitėms po užsikrėtimo SARS-CoV-2 virusu ir tiek ilgai reikia laukti, kol bus atliktas tyrimas. Tai reiškia, kad COVID-19 infekcijos diagnozė, pagrįsta šeimininko antikūnų atsaku, dažnai bus įmanoma tik sveikimo fazėje, kai jau praeis daugelis klinikinės intervencijos ar ligos perdavimo prevencijos galimybių.
Šiuo metu pirmiau minėti RDT patvirtinti tik atliekant mokslinius tyrimus, o ne klinikinei diagnozei, nes trūksta duomenų (3, 4). Kai bus prieinama vis daugiau epidemiologinių duomenų apie COVID-19, daugiau RDT bus sukurta ir patvirtinta kaip priežiūros taško tyrimai klinikinėje aplinkoje, nes jie gali duoti rezultatus per 10–30 minučių, o ne NAAT pagrįsti tyrimai, kurių vidutiniškai reikia. kelias valandas ligai nustatyti.
***
Nuorodos:
1. PSO, 2020. Laboratorinių tyrimų strategijos rekomendacijos dėl COVID-19. Laikinosios rekomendacijos. 21 m. kovo 2020 d. Prieiga internete adresu https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Žiūrėta 09 m. balandžio 2020 d
2. CDC 2020. Informacija laboratorijoms. Laikinąsias laboratorijų rekomendacijas galima rasti internete adresu https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Žiūrėta 09 m. balandžio 2020 d.
3. PSO, 2020. Patarimai dėl Point of Care testų naudojimo. Mokslinis trumpinys. 08 m. balandžio 2020 d. Prieiga internete adresu https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Žiūrėta 09 m. balandžio 2020 d.
4. ECDC, 2020. Greitojo COVID-19 diagnozės tyrimo padėties ES / EEE apžvalga. 01 m. balandžio 2020 d. Europos ligų prevencijos ir kontrolės centras. Galima internetu adresu https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Žiūrėta 09 m. balandžio 2020 d
***
